Отримання великої клількості пухлиноспецифчних T-лімфоцитів із застосуванням методу індукованої плюрипотентності

Центр дослідження алергії та імунології в Японії (Research Centre for Allergy and Immunology, Yokohama Institute) повідомляє про успішне перепрограмування Т-кіллерів, специфічних до певного пухлинного антигену, за методом індукованої плюрипотентності (induced pluripotent stem cells – iPS cells). Однією з проблем використання Т-кіллерів в терапії раку є те, що вони мають обмежену тривалість життя і тому не встигають нанести пухлині відчутної шкоди. Ще однією проблемою є те, що після культивування Т-клітин ex vivo можна отримати лише обмежену кількість готових до боротьби із пухлиною лімфоцитів. Відповідно постало питання яким чином можна збільшити вихід пухлино-специфічних Т-кіллерів та подовжити їхній термін життя в організмі пацієнта.

В експерименті in vivo на мишах вчені спочатку відібрали зрілі Т-лімфоцити, здатні розпізнавати МНС-І-презентований антиген злоякісної меланоми MART-1, потім ці клітини інфікували вірусом Сендаі, в геномі якого містилися гени фікторів Яманака (Yamanaka factors: Klf4, Sox2, Oct4 та c-Myc) і великий Т-антиген вірусу SV40. Введенні ектопічні копії генів, характерних для стовбурових плюрипотентних клітин, і вірусного онкогену, надавали попередньо відібраним Т-кіллерам, що несли потрібний Т-клітинний рецептор (TCR), здатності до активних та тривалих поділів в культурі in vitro. Таким чином було створено стабільну клітинну лінію з Т-лімфоцитів, що із багатьох можливих варіантів несуть визначений тип реаранжування TCR, найбільш споріднений до МНС-І-MART-1. Перед введенням Т-лімфоцитів у кровоносне русло піддослідної тварини виконувалося зворотне перетворення імморталізованих Т-клітин назад у зрілі кіллери. Для повернення культури лімфоцитів зі стану стовбуровості їх культивували із стромальними клітинами OP9/DLL1.

Виявилося, що більшість диференційованих тиким чином клітин зберегли експресію Т-клітинного рецептора, високоспецифічного до МНС-І-MART-1, і були готові розпізнавати та вбивати клітини злоякісної меланоми. Більше того, такі клітини мали подовжену тривалість життя та активно продукували протипухлинний цитокін – інтерферон-ϒ. Таким чином дослідники продемонстрували можливе вирішення проблеми швидкого вичерпання терапевтичного потенціалу специфічних протипухлинних Т-кіллерів. Традиційним недоліком такого терапевтичного підходу є те, що не у  всіх пухлинах можна віднайти більш-менш специфічні антигени, а також те, що штучно активовані і селектовані Т-кіллери можуть атакувати здорові тканин, оскільки більшість пухлинних антигенів не  є специфічними саме для пухлин. Автори дослідження планують продовжити дослідження Т-кіллерних клітинних ліній на предмет надмірної імунореактивності.

А. Культура лімфоцитів JKF6 була отримана шляхом ізоляції пухлино-інфільтруючих лімфоцитів, вона збагачена на цитотоксичні Т-лімфоцити, специфічні до МНС-І-презентованого антигену злоякісної меланоми MART-1. Згадана культура слугувала джерелом Т-кіллерів, які були взяті для подальших маніпуляцій. Б. Т-лімфоцити були піддані трансфекції вірусом Сендай, який несе репрограмуючі фактори Яманака. Геном вірусу Сендай представлений одноланцюговою РНК і весь його життєвий цикл проходить в цитоплазмі. Він був розроблений японськими вченими спеціально для цитоплазматичної гіперекспресії цільових генів, тобто без інтеграції в геном клітини-господаря. Це дозволяє обійти основний ризик генної інженерії: непластичну трансформацію клітин, що отримують вектор, спричинену інсерційним мутагенезом. В. На даний момент вчені завершили вивчення диференційованих на OP9/DLL1-фідері Т-лімфоцити і готові починати тестування їхньої пухлиносупресорної активності на моделі in vivo.

Посилання

ScienceDaily

Cell_Stem_Cell

Advertisements

Залишити відповідь

Заповніть поля нижче або авторизуйтесь клікнувши по іконці

Лого WordPress.com

Ви коментуєте, використовуючи свій обліковий запис WordPress.com. Log Out / Змінити )

Twitter picture

Ви коментуєте, використовуючи свій обліковий запис Twitter. Log Out / Змінити )

Facebook photo

Ви коментуєте, використовуючи свій обліковий запис Facebook. Log Out / Змінити )

Google+ photo

Ви коментуєте, використовуючи свій обліковий запис Google+. Log Out / Змінити )

З’єднання з %s